石蜡包埋切片制作法

这是最常用的切片法。以石蜡作为组织的填充支持介质，将整块组织加以包埋，***凝固成均匀一致的固态结构。用切片机制取极薄的切片。为了让石蜡能浸入组织内部，需将组织经过脱水等处理。过程大致如下：

⑴固定：生物标本脱离机体或培养环境，细胞会发生自溶，腐败分解。因此，需用固定剂处理，使蛋白质凝固停止濒死或死后变化。凡供***保存的标本都需经固定处理。

常用的固定剂是甲醛、乙醇等，能使蛋白质凝固。还有由几种试剂配成的固定液，例如Carnoy固定液，由无水酒精、氯仿、冰醋酸配成，固定力更快更强，不含水分，可避免水溶性物质如糖原等在固定过程中损失。

透明   （1）二甲苯Ⅰ 20min  （2）二甲苯Ⅱ 20min  （3）二甲苯Ⅲ 20min  ［注意事项］①二甲苯的容积应为社团块总体积的5～10倍以上。②社团块在二甲苯中透明的时间不宜过长（以防社团硬、脆），并依不同品类社团及其大小而异；社团出现棕黄或暗红色透明即可。③二甲苯应及时过滤、更换。④社团经二甲苯程度适当处理后不显透明时，常提示该社团的固定或脱水不充分，应查找原因并妥帖处理。

浸蜡   （1）石蜡Ⅰ（45~50℃） 60min  （2）石蜡Ⅱ（56~58℃） 60min  （3）石蜡Ⅲ（56~58℃） 60min   ［注意事项］①熔化石蜡必须有专人负责，必须在熔蜡箱内或水浴中（70   ℃）进行，不患上用有焰的火加温。②熔蜡的容积应为社团块总体积的5～10倍以上。③社团块经二甲苯程度适当透明后方可转入浸蜡过程，应尽可能削减将透明后社团块表面的二甲苯带入熔蜡中。④浸蜡时间相宜，过短时浸蜡不充分（社团过软），过长时社团硬脆。⑤熔蜡应及时过滤、更换。

①新鲜恒冷箱冷冻切片，厚6~8μm，平贴在盖玻片上。

②滴染法：将有冷冻切片的盖玻片（标本面朝上）平放于预热好的培养皿中（底部垫一湿滤纸），滴加孵育液至全部覆盖组织，于37℃温箱中孵育45~60分钟（肝，心肌组织15分钟即可）。

③于生理盐水中冲洗二次（轻晃，以防脱片）。

④10%福尔马林生理盐水固定10分钟。

⑤15%酒精浸洗5分钟（换二次）。

⑥甘油明胶封片。

结果：酶活性强处呈蓝色颗粒（双甲沉淀），酶活性较低时形成紫红色单甲。在光镜下，该酶活性于肝小叶内分布呈明显分带现象，周边带强于中央带。在心肌细胞纵切面，酶活性颗粒沿心肌细胞长轴整齐排列，相邻心肌细胞的空白处为闰盘。