冷冻切片法

冷冻切片法是借组织在低温下，冻结变硬而达到符合切片要求。冷冻切片法需有冷冻切片机，或在普通切片上配制冷设施。恒冷切片机是***冷冻切片设备。它有一个恒冷箱，标本致冷台和切片机都装在箱内。恒冷箱的作用类似冰箱，可在一定范围内调整温度，其结构有利于保持箱内恒定低温，减少箱门打开时环境温度的干扰。切片机的轮转把手装在箱外，便于操纵切片。

冷冻切片法的优点是：在处理得当时，它可以限度地保持组织的新鲜状态。并且，由于不需经脱水、透明、浸蜡等过程中有机溶剂的处理，及湿箱浸蜡热的影响，甚至可不经固定。所以能很好地保存组织细胞的各种成分和酶的活性，因此在酶的组织化学研究中常用此切片法。

调整切片厚度调整器，以3-5um为宜，进行切片。切出的蜡片应连续成完整的带状，用毛笔轻轻将蜡片托起，而后用眼科镊夹起，正面向上放入水浴锅的温水中（水温一般低于蜡熔点10-12℃，在45-50℃左右），待切片展平后，即可进行分片和捞片。每次展片完后，必须认真清理水面，不得遗留组织碎片，以防造成污染。

将蜡片捞起并附贴于涂有蛋白甘油的载玻片上，捞片时应注意蜡片位置（放在载玻片左或右2/3处中央），要留出贴标签的空间，蜡片与载玻片之间应无气泡。捞起切片后，立即写上编号。

烤片：将已放置了蜡片的载玻片呈45o斜置片刻，待载玻片上的水分流下后插入切片架中，放入烤箱内烘烤，一般在60℃烤箱内烤30-60min，也可用烤片器烤片。经烘烤后，蜡熔化，切片牢固的贴于载玻片上。

石蜡包埋切片制作法

这是最常用的切片法。以石蜡作为组织的填充支持介质，将整块组织加以包埋，***凝固成均匀一致的固态结构。用切片机制取极薄的切片。为了让石蜡能浸入组织内部，需将组织经过脱水等处理。过程大致如下：

⑴固定：生物标本脱离机体或培养环境，细胞会发生自溶，腐败分解。因此，需用固定剂处理，使蛋白质凝固停止濒死或死后变化。凡供***保存的标本都需经固定处理。

常用的固定剂是甲醛、乙醇等，能使蛋白质凝固。还有由几种试剂配成的固定液，例如Carnoy固定液，由无水酒精、氯仿、冰醋酸配成，固定力更快更强，不含水分，可避免水溶性物质如糖原等在固定过程中损失。